Clonage
1) L’identification du gène d’intérêt :
La manipulation commence par l'identification du "gène d'intérêt" possédant la caractéristique que l'on veut insérer dans l'organisme. Ce gène peut provenir de tout organisme vivant, animal, bactérie ou plante grâce à l'universalité du code génétique. On doit ensuite isoler ce gène de son organisme d'origine.
2) La fabrication du plasmide :
Les scientifiques doivent ensuite préparer un plasmide (voir illustration). On incorpore le gène d'intérêt préalablement récupéré dans ce dernier ainsi que deux autres gènes qui permettent de contrôler la transformation génétique; la plupart du temps, l'un sert à résister à un antibiotique A et l'autre à un herbicide.
3) L’incorporation du plasmide dans la bactérie :
Une fois que le plasmide est prêt, on l'insère dans la bactérie,en incorporant en même temps les trois gènes. Cette bactérie est souvent l’espèce Escherichia Coli car elle possède la caractéristique de se dupliquer très rapidement.
4) La culture des bactéries :
On cultive ensuite cette bactérie qui va se reproduire très rapidement pour former de nombreuses bactéries qui possèdent toutes le plasmide incoporé. Pour vérifier si le gène de résistance à l'antibiotique agit, donc si le clonage du plasmide a bien fonctionné, on incorpore l'antibiotique A dans la culture. On enlève ensuite les bactéries qui n'ont pas résisté et on se retrouve donc avec 100% de bactéries possédant le plasmide initial.
5) L’extraction des plasmides :
Après que les bactéries se soient bien développées, il faut à présent isoler les plasmides clonés de la même manière que nous les avons insérés. Lorsque de cette isolation, il faut supprimer le gène de résistance à l’antibiotique A qui nous a été d’une très grande utilité dans l’étape précédente, mais qui ne